Proteinkonzentrationsrechner (A280)
Berechnen Sie die Proteinkonzentration aus der Absorption bei 280 nm unter Verwendung des Lambert-Beerschen Gesetzes mit dem Extinktionskoeffizienten des Proteins.
So verwenden Sie den Proteinkonzentrationsrechner
- Messen Sie die Absorption Ihrer Proteinprobe bei 280 nm.
- Geben Sie den A280-Wert ein.
- Geben Sie den auf die Probe angewendeten Verdünnungsfaktor ein.
- Geben Sie den Extinktionskoeffizienten für Ihr Protein ein (ml·mg⁻¹·cm⁻¹).
- Klicken Sie auf Berechnen, um die Proteinkonzentration zu erhalten.
Anwendungsfälle
- •Quantifizierung gereinigter rekombinanter Proteine nach der Chromatographie.
- •Bestimmung der Antikörperkonzentration für die therapeutische Formulierung.
- •Überwachung der Proteinrückgewinnung über alle Reinigungsschritte hinweg.
Formel
Formel: Konzentration (mg/ml) = A280 × Verdünnungsfaktor / Extinktionskoeffizient (ml·mg⁻¹·cm⁻¹).
Häufig gestellte Fragen
Welchen Extinktionskoeffizienten sollte ich verwenden?
Der molare Extinktionskoeffizient ist proteinspezifisch und hängt vom Tryptophan-, Tyrosin- und Cysteingehalt ab. Für IgG-Antikörper beträgt ein üblicher Wert 1,4 ml·mg⁻¹·cm⁻¹. Verwenden Sie ExPASy ProtParam, um es aus der Aminosäuresequenz zu berechnen.
Wann wird die A280-Messung der Bradford/BCA-Messung vorgezogen?
A280 ist zerstörungsfrei, schnell und verbraucht keine Probe. Allerdings können Nukleinsäurekontaminationen (A260) und andere UV-absorbierende Verbindungen störend sein.
Haftungsausschluss
Nur für Bildungs- und Laborzwecke. Die Genauigkeit hängt von der Verwendung des richtigen Extinktionskoeffizienten für das spezifische Protein und der Sicherstellung, dass die Weglänge der Probenküvette 1 cm beträgt, ab.