PCR Primer Tm-Rechner
Berechnen Sie die Schmelztemperatur (Tm) eines PCR-Primers mithilfe der Wallace-Regel: Tm = 2(A+T) + 4(G+C).
So verwenden Sie den PCR Primer Tm-Rechner
- Zählen Sie jedes Nukleotid in Ihrer Primersequenz.
- Geben Sie die Anzahl der Adenin (A)-Basen ein.
- Geben Sie die Anzahl der Thymin (T)-Basen ein.
- Geben Sie die Anzahl der Guanin (G)-Basen ein.
- Geben Sie die Anzahl der Cytosin (C)-Basen ein.
- Klicken Sie auf Berechnen, um Tm, GC-Gehalt und Primerlänge anzuzeigen.
Anwendungsfälle
- •Entwerfen von PCR-Primern für Genklonierungs- und Expressionsstudien.
- •Optimierung der Annealing-Temperaturen für PCR-Protokolle.
- •Vergleich von Primerpaaren für ähnliche Tm-Werte in der Multiplex-PCR.
Formel
Wallace-Regel: Tm = 2 × (A + T) + 4 × (G + C). Gültig für Primer bis ~20 bp. Für längere Primer verwenden Sie die Nearest-Neighbor-Methode.
Häufig gestellte Fragen
Was ist Primer Tm?
Die Schmelztemperatur (Tm) ist die Temperatur, bei der 50 % des Primers an seine komplementäre Sequenz angelagert werden. Sie bestimmt die Wahl der PCR-Annealing-Temperatur, die typischerweise 5 °C unter Tm liegt.
Wann sollte ich die Wallace-Regel anwenden?
Die Wallace-Regel gilt für kurze Oligonukleotide (< 20 bp) unter Standardsalzbedingungen. Für längere oder komplexe Primer verwenden Sie thermodynamische Berechnungen für den nächsten Nachbarn.
Haftungsausschluss
Nur für Bildungs- und Forschungszwecke. Die tatsächlichen Tm-Werte variieren je nach Salzkonzentration, Primerkonzentration und Sekundärstruktur. Eine experimentelle Validierung wird empfohlen.